結(jié)合此前討論的豬葡萄球菌PCR檢測試劑盒操作、結(jié)果判定的相關(guān)背景，這類檢測的常見問題集中在結(jié)果偏差、操作環(huán)節(jié)、體系適配三大類，具體如下：

?假陽性結(jié)果?

多由樣本交叉污染、試劑被外源核酸污染、擴(kuò)增產(chǎn)物殘留引發(fā)，也可能是引物設(shè)計不合理出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增，導(dǎo)致陰性樣本被誤判為陽性。

?假陰性結(jié)果?

常見原因包括樣本采集不到位、核酸提取失敗導(dǎo)致目標(biāo)DNA丟失，試劑反復(fù)凍融后酶活性下降，PCR儀溫控不準(zhǔn)、擴(kuò)增程序設(shè)置錯誤，樣本中存在血紅蛋白等PCR抑制物干擾反應(yīng)。

?結(jié)果重復(fù)性差?

不同批次檢測的同一樣本Ct值波動大，多是因?yàn)椴僮鲿r加樣誤差大、試劑未充分混勻，或核酸提取效率不穩(wěn)定導(dǎo)致。

?內(nèi)參擴(kuò)增異常?

內(nèi)參無擴(kuò)增信號，說明樣本核酸提取失敗，無法判定目標(biāo)基因的真實(shí)情況，該批次樣本檢測結(jié)果全部無效。

?儀器適配問題?

部分非通用型號的熒光PCR儀，未提前校準(zhǔn)熒光通道，會出現(xiàn)FAM通道信號采集不全，無法正常讀取擴(kuò)增曲線的情況。